021-57609976
成人脂肪间充质干细胞
|
一、细胞基本属性 |
|
|
细胞名称 |
成人脂肪间充质干细胞 |
|
英文名称 |
Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells（H ADSCs） |
|
商品货号 |
ORCB2001H |
|
种属来源 |
人 |
|
组织来源 |
脂肪 |
|
细胞形态 |
成纤维细胞样 |
|
生长特性 |
贴壁生长 |
|
产品规格 |
1X10^6cells/T25培养瓶 |
|
产品描述 |
成人脂肪间充质干细胞取自健康成人抽脂手术所得脂肪组织，经检测， |
|
培养体系 |
成人脂肪间充质干细胞专用培养基 |
|
换液频率 |
发现有比较多的死细胞或培养基颜色较黄时，应换液。一般为每 2-3 天换液 |
|
传代比例 |
一般为 1:2 |
|
传代周期 |
细胞汇合度达 80%~90%时，可进行传代，一般为 48~72 h，不可让间充质干细 |
|
培养条件 |
气相：空气，95%；CO2，5%; 温度：37℃ |
一、 收货后处理方法
收到细胞后请检查包装是否完整，干冰是否充足，冻存管有无破损，并核对管身标签信息和数量，确认是否与装箱单一致。如有异常情况，请及时与我们联系。
如不立即进行实验，请将细胞放至-80°C或液氮中保存。
二、 H ADSCs的复苏
1. 实验前开启水浴锅预热完全培养基。
2. 在工作台中准备好 15 mL 离心管加入 5 mL预热后的完全培养基。
3. 从-80°C 冰箱中取出冻存管，将冻存管置于37°C水浴锅内，快速摇动解冻直到内容物融化，同时需注意避免水面没过管口。NOTE：建议将液氮中的细胞提前取出置于-80°C 待液氮挥发后复苏。
4. 对冻存管外壁进行常规消毒后，在工作台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至 15 mL 离心管内。使用 1 mL 培养基清洗冻存管内壁，一并收集至 15 mL 离心管内。
5. 250 g 离心 5 min，收集细胞沉淀，弃掉上清并加入 2 mL 完全培养基重悬（如有台盼蓝可取少量进行染色计数）。
6. 将重悬后的细胞接种至 T25 或同等底面积器皿，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
7. 24h 后镜下拍照观察，换液后继续培养。如有异常情况，请及时与我们联系。
三、 H ADSCs的传代
1. 预热 1×PBS、胰酶和完全培养基。
2. 吸去原培养基。用 1×PBS 洗涤细胞 2~3 次。
3. 吸去 1×PBS。加入胰酶。轻轻旋转，使胰酶覆 盖 细 胞 表 面 ， 消 化 ， 显 微 镜 下 观 察 约
70%~80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿外壁使细胞脱壁。
4. 当观察到细胞明显脱落，立即加入预热的完全培养基终止消化。用吸管吸取液体，反复轻柔吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。NOTE：建议可添加 2 倍胰酶用量的完全培养基用于终止消化。
5. 将细胞悬液转移到离心管中。用 1xPBS 清洗底壁，收集细胞悬液至离心管中。
6. 250 g 离心 5 min。
7. 小心弃去上清液，加入 1~2mL 完全培养基重悬细胞。
8. 选择合适的培养器皿，加入适量完全培养基，按照合适的传代比例（一般为 1:2）接种细胞，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
9. 把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
四、 H ADSCs的冻存
1. 待细胞生长至可传代的汇合度，即可消化准备冻存。
2. 消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心5 min。
3. 小心弃掉上清。用4°C预冷的冻存液重悬细胞，一般冻存密度为1×10^6个/mL。
4. 对冻存管进行标识后，把细胞分装到冻存管中，旋紧冻存管盖。
5. 如使用澳睿赛冻存液，冻存管直接竖直放入-80°C冰箱即可。如使用程序冻存液，需将冻存管放入程序降温盒后方可放入-80°C冰箱。
6. 24小时后可将细胞转移到液氮进行长期保存。
五、 该细胞只可用于科研。
1. 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2. 本产品未通过用于活体诊断的审核
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
