1.细胞培养液中一定要加HEPES，作用是稳定液体的PH。
2.以培养基颜色的变化作为换液的指标，是不够，但很实用。因为培养液中有指示剂酚红存在，故液体颜色的变化可间接提示细胞生长的状态。细胞生长旺盛，产酸，液体呈黄色；反之，液体会呈紫红色。
3.在观察细胞时，液体ph变化大，会对细胞产生伤害，对细胞生长不利。
PS: HEPES的化学全称位呱嗪乙硫磺酸(N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid )。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
传统细胞基础培养基是红色的，因为其中含有酚红，弱碱性的酚红呈红色，作为细胞培养pH指示。同时，由于缓冲体系的原因，要维持弱碱性的pH值需要使用二氧化碳培养箱。
是否所有的细胞培养基均适用同样的CO2浓度？其实不然，CO2浓度的选择取决于NaHCO3浓度。CO2和溶液中的-HCO3形成缓冲体系，使得整个培养体系的pH值维持在弱碱性(7左右)，这也是哺乳动物细胞生长的最适pH值。当培养基长时间暴露在空气中是，-HCO3会迅速分解，pH值快速升高，视觉观感上即是从红变紫。当再次将培养基放到细胞培养箱中后，在CO2的作用下，又会缓慢地从紫变回红色。
不同的细胞培养基的NaHCO3浓度不一样，使用不用的细胞培养基应选择与之对应的CO2浓度：
NaHCO3 (g/L) 浓度<1.5时，所需CO2浓度为4%；
NaHCO3 (g/L) 浓度处于1.5-2.2时，所需CO2浓度为5%；
NaHCO3 (g/L) 浓度处于2.2-3.4时，所需CO2浓度为7%；
NaHCO3 (g/L) >3.5时，所需CO2浓度为10%。
随着细胞不断生长，pH值逐渐不断下降(由于乳酸的代谢性积累)，培养基会变成黄色。当我们发现培养过程中培养液的pH发生不正常地变化时，我们需要这样做：
1.确定是否使用不当的二氧化碳浓度：依据培养基中的碳酸氢钠浓度来增加或降低培养箱中的二氧化碳百分比。对于2.0至3.7 g/L的碳酸氢钠，分别使用5-10%的二氧化碳浓度。或换用不依赖二氧化碳的培养基。
2.确定是否组织培养瓶盖子过紧：将盖子拧松1/4圈。
3.确定是否碳酸氢盐缓冲不充分：加入HEPES缓冲液，使最终浓度达到10-25 mM。
4.确定是否培养基中含有错误的盐分：请在CO2条件下使用Earle's盐培养基，在大气环境下使用Hanks'盐培养基。
5.确定是否细菌，酵母或真菌污染：丢弃培养物及培养基，尝试对培养物进行去污染。
