一、细胞基本属性

细胞名称

NP69(人永生化鼻咽上皮细胞)

细胞别称

NP69SV40T; NP-69

细胞货号

ORC1233

种属来源

鼻咽； SV40转化；男性

生长特性

贴壁细胞

细胞形态

上皮细胞样

背景简介

NP69细胞来源于用含有SV40大T抗原的PX8质粒转染的活检分离的原代鼻咽上皮细 胞的P1代培养物。 NP69细胞保留了正常鼻咽细胞的许多特征 ，包括角蛋白谱和对   TGF- β的反应 ， 同时具有在NPC中观察到的许多遗传特征。 NP69细胞是非致瘤性    的 ，并且表现出贴壁依赖性生长。 NP69细胞对于研究病毒相关肿瘤发生的机制特    别有用。

生物安全等级

1

细胞规格

1 × 106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装

支原体检测

无

培养基

T25瓶10-12ml ； 10cm皿12-15ml

培养条件

空气 ，95% ； 二氧化碳 (CO2) ， 5%

冻存液配方

92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%完全培养基+8%DMSO(高手推荐);

冻存规格

200-300万/ml ， 1ml每管

倍增时间

~12-30小时

冻存方法

1.消化并离心获得细胞沉淀后 ，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；

2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；

3.将冻存管转入程序冻存盒 ，放入-80度冰箱过夜 ，第二天转入液氮保存；没有程序 冻存盒的实验室 ，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min ，再-20  度静置2h后转入-80度过夜 ，第二天转入液氮保存

换液周期

2~3天

传代方法

1.尽量吸干净T25瓶原培养基；

2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s ，吸走润洗的PBS；

3.T25瓶加1ml左右胰酶 ，轻轻晃动培养瓶以使胰酶铺匀瓶底细胞层； 4.将培养瓶放入37度培养箱消化；

5.消化到细胞间隙变大 ，但未完全脱落时加2-3ml完全培养基终止胰酶消化； 6.混匀细胞 ，900rpm离心3-5min ，弃上清；

7.加新的完全培养基轻轻重悬细胞 ，均匀分到新的培养瓶里；

8.补足完全培养基 ，将培养瓶放回培养箱静置培养；

H-2d

注意事项

冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性 ，若有异常 ，及时调整实验方 案