大鼠鼓膜上皮干细胞_大鼠原代细胞_原代细胞_澳睿赛生物技术（上海）有限公司

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大鼠鼓膜上皮干细胞

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商品货号: ORCR424

商品库存： 10000

规格： 5×10^5cel

上架时间： 2023-07-07

商品重量： 500克

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规格参数

- 产品名称：大鼠鼓膜上皮干细胞
- 产品品牌：澳培赛生物
- 细胞形态：铺路石状细胞
- 组织来源：鼓膜组织
- 种属来源：大鼠
- 规格：5×10⁵Cells/T25培养瓶
- 传代特性：根据细胞特性

大鼠鼓膜上皮干细胞

一、细胞基本属性
细胞名称	大鼠原代鼓膜上皮干细胞
组织来源	鼓膜组织
商品货号	ORCR424
种属来源	大鼠
产品规格	5×10⁵cells/T25细胞培养瓶
细胞简介	鼓膜也称耳膜，为一弹性灰白色半透明薄膜，将外耳道与中耳隔开。鼓膜穿孔不能愈合，可能与干细胞受损或增殖抑制有关。鼓膜上皮干细胞的分布与鼓膜的血供丰富的区域一致。鼓膜上皮干细胞高表达β1整合素，有很强的黏附型，对Ⅳ型胶原的黏附鼻其他细胞更快、更强。
培养基	原代角质形成细胞培养体系
换液频率	每2-3天换液一次
生长特性	贴壁
细胞形态	铺路石状细胞
传代特性	根据细胞特性
消化液	0.25%胰蛋白酶
培养条件	气相：空气，95%； CO2 ， 5%

质量检测：澳睿赛实验室分离的大鼠原代鼓膜上皮干细胞经广谱角蛋白(PCK)免疫荧光染色为阳性，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

大鼠原代鼓膜上皮干细胞体外培养周期有限；建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

二、细胞培养状态

发货时发送细胞电子版照片

三、使用方法

在澳睿赛技术部标准操作流程下，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2. 贴壁细胞消化

1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；

3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

3. 悬浮细胞处理

1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1 - 2次，收集清洗液；

2) 1200 - 1500rpm离心3min ，弃上清，收集细胞沉淀；

3)加入5ml 新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C 、 5 % CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0 . 25%胰蛋白酶消化液2m L至离心管中，用吸 - 管轻轻吹打混匀，37°C温浴2 - 3 min ，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞； 1200rpm离心5min ，弃上清，收集细胞沉淀；

5)加入5ml 新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5m L ，置于37°C 、 5 % CO2 、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

6)待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。

4. 细胞收货脱落

1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；

3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；

4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。

5. 细胞实验

因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2），多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。

四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和澳睿赛技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。

5. 该细胞只可用于科研。

1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核

2)本产品未通过用于活体诊断的审核