| 一、细胞基本属性 |
| 细胞名称 |
人肝星状细胞 |
| 组织来源 |
肝脏组织 |
| 商品货号 |
ORCH351 |
| 种属来源 |
人 |
| 产品规格 |
5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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细胞简介
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肝星状细胞位于Disse间隙内，紧贴着肝窦内皮细胞和肝实质细胞。其形态不规则 ，胞体呈圆形或不规则形，常伸出数个星状胞突包绕着肝血窦。
正常情况下肝星状细胞表现为富含维生素A脂滴的静止型， 其功能主要有：代谢和 贮存维生素A、储存脂肪、合成和分泌胶原及糖蛋白、蛋白多糖等基质成分、合成 基质金属蛋白酶及其组织抑制剂、表达细胞因子及受体、参与肝窦血流调节。
肝星状细胞是细胞外基质的主要来源，正常情况下肝星状细胞处于静止状态。当 肝脏受到炎症或机械刺激等损伤时， 肝星状细胞被激活， 其表型由静止型转变为 激活型，肝星状细胞激活并转化为肌成纤维细胞样细胞， 各种致纤维化因素均把 HSC作为最终靶细胞。激活的肝星状细胞一方面通过增生和分泌细胞外基质参与 肝纤维化的形成和肝内结构的重建， 另一方面通过细胞收缩使肝窦内压升高。
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| 培养基 |
原代星状细胞培养体系 |
| 换液频率 |
每2-3天换液一次 |
| 生长特性 |
贴壁培养 |
| 细胞形态 |
长梭状，星状细胞 |
| 传代特性 |
细胞特性确定传代 |
| 消化液 |
0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 |
气相： 空气，95%；CO2 ，5% |
质量检测： 澳睿赛实验室分离的人肝星状细胞经CD95L免疫荧光染色为阳性(静止状态) ；结蛋白(
Desmin)或者平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 免疫荧光染色为阳性，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人肝星状细胞体外培养周期有限；建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；
2)1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；
3)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸-管轻轻吹打混匀，37°C温浴2-3min，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞；1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；
5)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
6)待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和澳睿赛技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
021-57609976
人肝星状细胞完全培养基