澳睿赛生物专业承接原代细胞分离、培养、诱导分化等细胞实验的各种基础准备工作，经手操作大量的生物细胞资源，总结出一套简单适合大多数动物细胞分离与培养传代的经验，一起来看看吧！

动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。

我们常见的动物细胞培养种类主要分为，原代细胞培养与传代细胞培养，今天我们来看看原代细胞培养的详细步骤！

原代细胞培养是指将动物各种组织从机体中取出，经各种胰蛋白酶、螯合剂或机械方法处理，分散成单细胞，在合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。培养的细胞为正常的动物细胞，一般培养10代后不再增殖，死亡。

动物的原代细胞培养步骤分别为：取材、漂洗、剪切、消化、制备单细胞悬液、接种、培养等步骤

1、待培养细胞组织取材

颈椎脱臼法处死小鼠，放在100ml的烧杯中用70%乙醇消毒3min。用剪刀剪开腹部，取出肾、肝、脾(任意一种脏器)。

• 将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1%新洁尔灭浸泡消毒，迅速进入无菌室。
• 将小白鼠置超净工作台上，打开腹腔

2、清洗组织

• 在盛有PBS缓冲液平皿中洗涤数次，剔除包膜、结缔组织，将剔除后的脏器放入另一个盛有PBS的平皿中。

3、剪切组织

• 将肾、肝、脾剪成1mm3(剪成肉末状)大小的组织块，再次清洗，洗去残留的血细胞，以备消化。

4、消化组织

• 在50ml离心筒中加入0.25%胰蛋白酶溶液25ml在温暖的环境中或置于37°水浴摇床中轻轻摇动15min，转速约为180r/min。
• 让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入Im小牛血清的比例加入生血清以灭活胰蛋白酶。(小牛血清在共用无菌操作台上取用)
• 在离心管中残留未消化组织块中再次加入胰蛋白酶进行消化，重复以上1和2步骤。

5、制备单细胞悬液

• 将混合的细胞悬液离心，1200rpm，5min，弃上清。
• 将沉淀用新鲜的无菌PBS重悬，再1000-1200rpm，5min离心。
• 用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止，然后再按照第一步进行离心，离心后弃去上清液，将沉淀用少量细胞培养液反复吹打，制成细胞悬液。

6、细胞接种

• 将细胞悬液接种到细胞培养瓶中。
• 用滤器过滤细胞培养液再悬沉淀，并使终体积为20ml。

7、细胞培养

• 在培养瓶外做好标记(标明所培养细胞的名称和时间)，
• 置于CO₂的孵箱中培养，
• 72h后即可观察。

关于动物细胞培养的原代细胞分离与培养步骤我们就介绍到这里啦，当然不一定所有的细胞培养步骤都一模一样，有一些要用特定的培养基与培养条件，如果有不懂的实操问题或有细胞实验需外包与代做，可以随时给客服留言，澳睿赛的技术会第一时间给到您回复的哦！