①盖玻片的选择：可使用专用细胞爬片（价格较贵）、也可使用一般盖玻片。

②爬片的剪裁：将使用的爬片剪裁合适的大小，置于6孔板、12孔板、24孔板，后续可根据自己实验所需，染色后将之切割，这样保证细胞的均一性，也可同时做多个指标的染色。

③爬片的使用前操作：将已经裁剪好的爬片置于浓硫酸中过夜，次日使用自来水冲洗20遍，将其放在无水酒精中置6小时，再使用三蒸水清洗3遍（作用是将爬片上的酸清洗干净，后续免于细胞贴壁效果不好），将爬片置于培养皿中进行烘干及高压消毒，入烤箱烤干，放进超净台待使用。 

①胰酶消化细胞后，将其计数重悬细胞置于完全培养基中。

②根据准备的玻片大小放入细胞，向实验预留的孔板位置滴入少量的培养基，其目的是将玻片与培养皿粘合在一起，后续可防止加细胞悬液时，玻片与培养皿漂起，造成双层细胞贴片。注！整个过程需无菌操作

③根据自己实验的需求，选择合适的细胞密度种入培养板内。

④待细胞贴壁后，去上清，加含药培养基。

⑤按实验设计，一段时间后取玻片，取玻片时，应注意玻片与培养皿粘合，只需将注射器往背面弯曲，再将爬片轻轻勾起，用镊子取出即可。

⑥未取出的可继续培养。

①取出细胞爬片的时候，先使用PBS清洗2遍，再进行固定。

注！如需进行凋亡的TUNEL染色时可免洗，因为凋亡的细胞可能会在清洗的过程中脱落。

②在使用培养皿保存细胞爬片时，应注意在培养皿垫一张面巾纸，这样在后续拿放爬片时更方便，盖上盖子做好标记，可使用透明胶带将盖子和培养皿黏在一起。

③一般情况下，-20°保存2-3个月的片子，做免疫组化是没有问题的。

①冷丙酮—可用于一般的免疫组化染色

将纯的丙酮先放入冰箱-20°变成冷丙酮（丙酮在此温度下不会变成固体），细胞爬片取出后，使用PBS清洗2遍，加入加入冷丙酮置于-20°（丙酮具有很强的挥发性，注意将含有丙酮和爬片器皿盖严，防止其挥发）。

固定十分钟后，室温吹干，然后放入-20°保存。

②多聚甲醛（常用4%)—可用于免疫电镜、免疫荧光及TUNEL染色

主要检测组织内一些性能较弱的抗原，特别是细胞表面抗原，例如：各淋巴细胸分化决定簇（CD)、主要组织抗原相容性抗原等，

室温固定15分钟后，将其表面液体吹干，放置-20°保存。

③95%乙醇—可用于免疫组化

优点：穿透性强，抗原保存比较好。

缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解，染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。

室温固定15分钟后，将表面液体吹干，放置-20°保存。

④甲醛（福尔马林）—应用广泛

优点：形态结构保持好，且穿透性很强。

缺点：甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液PH值降低影响染色，分子间交联形成的网络结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色结果。

室温固定十五分钟后，将表面液体吹干，放置-20°保存。